Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 1/CHRNB1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404205-ACT

CHRNB1 codifica la subunità β1 del recettore nicotinico dell’acetilcolina (nAChR) di tipo muscolare, un canale ionico attivato dal legame con il ligando che si assembla con le subunità α, δ ed ε/γ per mediare la trasmissione sinaptica rapida alla giunzione neuromuscolare. In seguito al legame dell’acetilcolina, il recettore si apre consentendo il flusso di cationi, collegando la segnalazione colinergica alla depolarizzazione di membrana, all’accoppiamento eccitazione–contrazione e al rimodellamento dipendente dall’attività dell’architettura postsinaptica. La funzione di CHRNB1 è integrata con la segnalazione agrina–LRP4–MuSK e con la rimozione sinaptica regolata dall’acetilcolinesterasi, che insieme mantengono la stabilità della placca motrice e l’eccitabilità muscolare. Alterazioni genetiche o autoimmuni che compromettono l’integrità dei nAChR sono associate alle sindromi miasteniche congenite e a meccanismi legati alla miastenia grave, rendendo CHRNB1 un bersaglio chiave per lo studio dei difetti della trasmissione neuromuscolare e della biologia dell’assemblaggio del recettore.

Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 1/CHRNB1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CHRNB1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 1/CHRNB1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CHRNB1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CHRNB1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 1/CHRNB1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CHRNB1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 1/CHRNB1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 1/CHRNB1 nelle cellule tumorali con espressione di CHRNB1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.