NHERF-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-424152

Panoramica

Slc9a3r1 codifica NHERF-1 (fattore regolatore dello scambiatore Na⁺/H⁺ 1), una proteina scaffold contenente domini PDZ che organizza recettori di membrana, trasportatori ionici e proteine di segnalazione nella corticale apicale. NHERF-1 collega complessi come NHE3 ad adattatori del citoscheletro (ad es. ezrina) per coordinare il trasporto ionico epiteliale, la polarità e la struttura dei microvilli, e modula la dinamica della segnalazione dei GPCR e delle tirosin-chinasi recettoriali. Attraverso queste interazioni, influenza processi tra cui endocitosi, traffico intracellulare e vie di segnalazione dipendenti dai fosfoinositidi che plasmano l’omeostasi cellulare. La disregolazione dell’impalcatura dipendente da NHERF-1 è stata collegata a disfunzioni epiteliali e a stati di segnalazione aberranti rilevanti per studi su infiammazione, integrità della barriera e rimodellamento di vie oncogeniche.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NHERF-1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Slc9a3r1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Slc9a3r1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Slc9a3r1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NHERF-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Slc9a3r1 per lo studio della segnalazione di NHERF-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Slc9a3r1 critici per la funzione di NHERF-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Slc9a3r1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NHERF-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal NHERF-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Slc9a3r1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NHERF-1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR NHERF-1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Slc9a3r1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Slc9a3r1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.