NFAT5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401359

Panoramica

NFAT5 (nuclear factor of activated T cells 5), noto anche come TonEBP, è un fattore di trascrizione della famiglia Rel che coordina l’adattamento cellulare allo stress ipertonico regolando programmi genici osmoprotettivi, inclusi trasportatori ed enzimi coinvolti nell’accumulo di osmoli compatibili. In contesti immunitari ed epiteliali, NFAT5 influenza la produzione di citochine, la polarizzazione dei macrofagi e la funzione dei linfociti, collegando il rilevamento delle variazioni osmotiche alla segnalazione infiammatoria e alle vie di sopravvivenza cellulare. L’attività di NFAT5 interagisce con le reti di segnalazione MAPK e calcio-dipendenti e contribuisce a mantenere l’omeostasi proteica e il controllo del volume cellulare sotto stress. Una segnalazione di NFAT5 deregolata è stata associata a disturbi infiammatori, alla fisiologia della midollare renale e alle risposte allo stress nel microambiente tumorale, rendendolo rilevante per studi meccanicistici sull’adattamento allo stress e sulla regolazione immunitaria.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NFAT5 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene NFAT5 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del NFAT5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto NFAT5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NFAT5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di NFAT5 per lo studio della segnalazione di NFAT5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni NFAT5 critici per la funzione di NFAT5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di NFAT5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NFAT5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal NFAT5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus NFAT5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NFAT5 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR NFAT5 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia NFAT5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio NFAT5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.