neurexin III Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406719

Panoramica

NRXN3 codifica la neurexina III, una molecola di adesione cellulare presinaptica che organizza la formazione e il mantenimento delle sinapsi legandosi a partner postsinaptici come le neuroligine e altre impalcature sinaptiche. Attraverso queste interazioni trans-sinaptiche, la neurexina III contribuisce a regolare la probabilità di rilascio dei neurotrasmettitori, la specificazione sinaptica e il rimodellamento dipendente dall’attività che modella la funzione dei circuiti neuronali. NRXN3 partecipa a vie coinvolte nell’esocitosi delle vescicole sinaptiche, nella segnalazione calcio-dipendente e nell’equilibrio eccitatorio/inibitorio nelle reti in sviluppo e in quelle mature. La variabilità genetica e l’alterata espressione di NRXN3 sono state associate a fenotipi neuroevolutivi e neuropsichiatrici, a supporto del suo impiego in studi meccanicistici sulla connettività sinaptica e sulla disfunzione dei circuiti.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO neurexin III (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene NRXN3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del NRXN3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto NRXN3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina neurexin III.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di NRXN3 per lo studio della segnalazione di neurexin III, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni NRXN3 critici per la funzione di neurexin III
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di NRXN3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal neurexin III CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal neurexin III CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus NRXN3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal neurexin III Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR neurexin III (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia NRXN3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio NRXN3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.