Neprilysin-2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405449-ACT

MMEL1は、ネプリライシン-2（membrane metalloendopeptidase-like 1）をコードしています。ネプリライシン-2は亜鉛依存性のメタロプロテアーゼで、細胞表面およびエンドメンブレン系コンパートメントに発現し、ペプチドのプロセシングと分解（ターンオーバー）に寄与します。生理活性ペプチドを制御的に切断することにより、ネプリライシン-2は局所的なシグナル伝達の動態、細胞外微小環境の組成、受容体を介した情報伝達に影響を与え得ます。その結果、MMEL1の活性はプロテオスタシスや炎症性シグナル伝達ネットワークと結び付けられます。遺伝学的関連解析により、MMEL1遺伝子座は免疫介在性の形質や神経炎症の生物学と関連付けられており、ペプチド代謝と免疫調節を結び付ける経路における重要性が支持されています。これらの特徴から、MMEL1はプロテアーゼ依存的シグナル伝達、細胞間コミュニケーション、疾患関連の制御回路の機構研究に有用な標的となります。

Neprilysin-2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MMEL1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Neprilysin-2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MMEL1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMMEL1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Neprilysin-2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMMEL1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNeprilysin-2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMMEL1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNeprilysin-2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。