Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
NDRG3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-424349
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- NDRG3 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico NDRG3, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: NDRG3 Antibody (H-11): sc-514561
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
NDRG3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-424349 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Ndrg3 codifica NDRG3, una proteina citoplasmatica della famiglia NDRG implicata nella regolazione della crescita cellulare, della differenziazione e dell’adattamento allo stress. Nei sistemi murini, NDRG3 è stata collegata alla segnalazione metabolica e a vie associate all’ipossia, inclusi meccanismi di stabilizzazione dipendenti dal lattato che possono influenzare programmi trascrizionali a valle. Un’attività alterata di NDRG3 è stata studiata in contesti di controllo della proliferazione e di sopravvivenza cellulare, rendendola rilevante per indagare come gli stimoli metabolici plasmino l’omeostasi tissutale. Queste funzioni collocano NDRG3 come un nodo utile per analizzare il cross-talk tra il sensing dei nutrienti, le risposte all’ipossia e le decisioni sul destino cellulare.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NDRG3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ndrg3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ndrg3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ndrg3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NDRG3.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ndrg3 per lo studio della segnalazione di NDRG3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Ndrg3 critici per la funzione di NDRG3
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ndrg3 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal NDRG3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal NDRG3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ndrg3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal NDRG3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR NDRG3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ndrg3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ndrg3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.