NCAM2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404803-ACT

NCAM2 (neural cell adhesion molecule 2) codifica una proteina di adesione della superfamiglia delle immunoglobuline associata alla membrana, arricchita nel sistema nervoso, che supporta la crescita dei neuriti, la guida assonale e l’assemblaggio delle sinapsi. Attraverso interazioni omofiliche ed eterofiliche sulla superficie cellulare, NCAM2 contribuisce al riconoscimento cellula-cellula e alla stabilizzazione dei contatti neuronali, influenzando il rimodellamento del citoscheletro e la connettività dipendente dall’attività. Alterazioni dell’espressione o della regolazione di NCAM2 sono state implicate in fenotipi neuroevolutivi e neuropsichiatrici, in linea con il suo ruolo nel plasmare le reti sinaptiche e la formazione dei circuiti neuronali. In quanto marcatore e modulatore della differenziazione neuronale e della plasticità, NCAM2 è ampiamente rilevante per studi sulla segnalazione dipendente dall’adesione e sull’organizzazione sinaptica.

NCAM2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NCAM2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

NCAM2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NCAM2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NCAM2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di NCAM2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NCAM2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da NCAM2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via NCAM2 nelle cellule tumorali con espressione di NCAM2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.