Myosin XVIIIB Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-410206-ACT

MYO18B umano codifica la miosina XVIIIB, una proteina motoria non convenzionale associata all’actina, implicata nell’organizzazione dell’architettura del citoscheletro e nel coordinamento di processi dipendenti dall’actina quali adesione cellulare, migrazione e organizzazione intracellulare. Attraverso interazioni con le reti di actina e con complessi di scaffolding, MYO18B contribuisce alla meccanotrasduzione e al mantenimento della morfologia cellulare, collegando la dinamica del citoscheletro a programmi di segnalazione più ampi che regolano la struttura dei tessuti. Un’espressione alterata di MYO18B o la perturbazione della regolazione del citoscheletro sono state riportate in studi di biologia tumorale e in fenotipi correlati al muscolo, in cui cambiamenti nell’organizzazione actomiosinica possono influenzare invasività, contrattilità e differenziamento. Di conseguenza, MYO18B è frequentemente studiato in vie che governano la motilità cellulare, il rimodellamento del citoscheletro e i cambiamenti del comportamento cellulare associati al cancro.

Myosin XVIIIB Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MYO18B senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Myosin XVIIIB Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MYO18B nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MYO18B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Myosin XVIIIB. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MYO18B nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Myosin XVIIIB nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Myosin XVIIIB nelle cellule tumorali con espressione di MYO18B silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.