Myosin VI Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401815-ACT

Il gene umano **MYO6** codifica la miosina VI, un motore non convenzionale basato sull’actina che, in modo unico, si muove verso l’estremità meno dei filamenti di actina per coordinare endocitosi, traffico vescicolare e rimodellamento di membrana. La miosina VI partecipa all’endocitosi mediata da clatrina, allo smistamento a livello di Golgi ed endosomi, al traffico correlato all’autofagia e al mantenimento della polarità epiteliale, e può influenzare le dinamiche del citoscheletro che modellano la migrazione cellulare. Attraverso interazioni con proteine adattatrici e complessi di segnalazione, MYO6 contribuisce a vie che regolano il trasporto intracellulare e l’organizzazione dell’actina in molteplici tipi cellulari. Un’alterata espressione o funzione di MYO6 è stata associata a fenotipi che coinvolgono l’omeostasi sensoriale ed epiteliale ed è stata studiata anche in ambiti di biologia tumorale, in cui i programmi di traffico e motilità risultano deregolati.

Myosin VI Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MYO6 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Myosin VI Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MYO6 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MYO6, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Myosin VI. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MYO6 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Myosin VI nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Myosin VI nelle cellule tumorali con espressione di MYO6 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.