Myosin Id Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403425-ACT

Il gene umano **MYO1D** codifica la miosina Id, un motore associato alle membrane e basato sull’actina, implicato nell’accoppiamento del citoscheletro corticale di actina con le membrane intracellulari. La miosina Id supporta processi quali il traffico di membrana, il riciclo endocitico e l’organizzazione della polarità e della forma cellulare, collegando il rimodellamento del citoscheletro al controllo spaziale della segnalazione a livello della membrana plasmatica. Attraverso queste funzioni, MYO1D può influenzare vie che dipendono dal trasporto vescicolare direzionato e dalla distribuzione dei recettori dipendente dal citoscheletro. La disregolazione delle dinamiche actina–membrana e dei programmi di polarità è rilevante per fenotipi associati a malattia, tra cui alterazioni della migrazione cellulare e dell’organizzazione epiteliale, rendendo MYO1D un bersaglio utile per studi meccanicistici sull’omeostasi cellulare.

Myosin Id Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MYO1D senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Myosin Id Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MYO1D nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MYO1D, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Myosin Id. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MYO1D nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Myosin Id nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Myosin Id nelle cellule tumorali con espressione di MYO1D silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.