MYH13 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400602-ACT

MYH13 codifica a cadeia pesada de miosina 13, uma proteína motora de músculo esquelético de contração rápida que impulsiona a contração dependente de actina por meio do ciclo de pontes cruzadas, acionado pela atividade ATPase, no interior do sarcômero. Como parte do aparato contrátil miofibrilar, MYH13 contribui para a especialização das fibras musculares e regula a geração de força e a velocidade de encurtamento no músculo estriado. A expressão alterada ou a desregulação de programas de miosina sarcomérica é relevante para estudos do desenvolvimento muscular, da mudança de tipo de fibra e de vias de remodelamento que afetam a fisiologia neuromuscular. Assim, MYH13 é um alvo molecular útil para investigar redes transcricionais que governam a estrutura e a função do músculo esquelético, incluindo a diferenciação miogênica e módulos gênicos associados à contratilidade.

MYH13 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MYH13 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MYH13 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MYH13 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MYH13, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MYH13. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MYH13 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MYH13 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MYH13 em células tumorais com expressão de MYH13 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.