MYEOV2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-409378

Panoramica

COPS9 codifica una componente centrale del signalosoma COP9, un complesso multiproteico che regola le ligasi ubiquitina cullin-RING controllando lo stato di neddilazione delle culline. Attraverso questa attività, COPS9 influenza la proteostasi dipendente dall’ubiquitina, la progressione del ciclo cellulare, le risposte al danno al DNA e le vie di trasduzione del segnale che governano proliferazione e differenziamento. L’alterazione della funzione del signalosoma COP9 può modificare il turnover di proteine regolatorie chiave e rimodellare i programmi di risposta allo stress e di sviluppo. Una regolazione anomala di questi processi è stata associata a fenotipi oncogenici e ad altri disturbi legati a uno squilibrio della via dell’ubiquitina.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MYEOV2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene COPS9 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del COPS9 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto COPS9 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MYEOV2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di COPS9 per lo studio della segnalazione di MYEOV2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni COPS9 critici per la funzione di MYEOV2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di COPS9 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MYEOV2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MYEOV2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus COPS9. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MYEOV2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MYEOV2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia COPS9 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio COPS9 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.