Plasmide CRISPR/Cas9 KO MYEOV2 (h): sc-409378

Présentation

COPS9 code un composant essentiel du signalosome COP9, un complexe multiprotéique qui régule les ligases ubiquitine culline-RING en contrôlant l’état de neddylation des cullines. Par cette activité, COPS9 influence la protéostasie dépendante de l’ubiquitine, la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et les voies de transduction du signal qui gouvernent la prolifération et la différenciation. Une perturbation de la fonction du signalosome COP9 peut modifier le renouvellement de protéines régulatrices clés et reconfigurer les programmes de stress et de développement. Une régulation aberrante de ces processus a été associée à des phénotypes oncogéniques et à d’autres troubles liés à un déséquilibre des voies de l’ubiquitine.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MYEOV2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène COPS9 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du COPS9, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert COPS9 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MYEOV2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en COPS9 pour l'étude de la signalisation de MYEOV2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de COPS9 essentiels à la fonction de MYEOV2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de COPS9 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MYEOV2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MYEOV2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus COPS9. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MYEOV2 plasmide HDR (h) et le MYEOV2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie COPS9 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles COPS9 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.