MYBPC3 Plasmide Double Nickase (h): sc-401409-NIC

MYBPC3 codifica per la proteina C legante la miosina cardiaca, una proteina accessoria del filamento spesso del sarcomero che modula il ciclo dei ponti trasversali actina–miosina e contribuisce alla stabilizzazione e alla regolazione della funzione contrattile. Attraverso interazioni dipendenti dalla fosforilazione con miosina e titina, MYBPC3 aiuta a modulare la contrattilità sensibile al calcio e sostiene l’assemblaggio ordinato e il mantenimento del sarcomero cardiaco. Alterazioni dell’espressione o della funzione di MYBPC3 perturbano l’organizzazione miofibrillare e la meccanica miocardica, collegando questo gene a fenotipi di cardiomiopatia ereditaria e a vie di rimodellamento cardiaco. In quanto gene strutturale cardiaco umano, MYBPC3 è ampiamente studiato in modelli di biologia del sarcomero, meccanotrasduzione e maturazione dei cardiomiociti.

MYBPC3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MYBPC3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MYBPC3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MYBPC3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MYBPC3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.