MTF-1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402846-ACT

MTF1 codifica il fattore di trascrizione 1 regolato dai metalli (MTF-1), una proteina che lega il DNA tramite dita di zinco e che coordina programmi trascrizionali deputati al controllo dell’omeostasi dei metalli cellulari e all’adattamento allo stress. In risposta a fluttuazioni dello Zn2+ intracellulare e all’esposizione a stress ossidativo o elettrofilo, MTF-1 regola geni sensibili ai metalli coinvolti nella detossificazione e nella citoprotezione, integrando segnali tra il controllo redox, la proteostasi e le vie di stress infiammatorio. Questo circuito trascrizionale interseca processi legati alla disomeostasi dei metalli e al danno ossidativo, frequentemente studiati in neurodegenerazione, disfunzioni metaboliche e cancerogenesi. In quanto mediatore centrale della regolazione genica in risposta allo stress, MTF-1 rappresenta un nodo accessibile per chiarire come il sensing dei metalli rimodelli le reti trascrizionali e le decisioni sul destino cellulare.

MTF-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MTF1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MTF-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MTF1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MTF1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MTF-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MTF1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MTF-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MTF-1 nelle cellule tumorali con espressione di MTF1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.