Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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MRG1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421714
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MRG1 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico MRG1, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: MRG1 Antibody (JA22): sc-21795
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MRG1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-421714 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Cited2 codifica il coregolatore trascrizionale MRG1, una proteina nucleare che si lega a CBP/p300 e modula programmi di espressione genica che controllano proliferazione, differenziamento e risposte cellulari allo stress nelle cellule di topo. Integrando segnali provenienti da fattori di trascrizione responsivi all’ipossia e da fattori trascrizionali dello sviluppo, MRG1 influenza gli output trascrizionali dipendenti da HIF e una regolazione più ampia, mediata dalla cromatina, della specificazione di linea. L’attività di Cited2 è collegata all’embriogenesi e all’organogenesi e un’alterata regolazione di questa via è stata associata a difetti nello sviluppo cardiovascolare ed ematopoietico. In quanto regolatore contesto-dipendente di reti trascrizionali, Cited2 è spesso studiato in modelli di infiammazione, stress metabolico e biologia tumorale, in cui la disponibilità di co-attivatori e la segnalazione ipossica orientano le decisioni sul destino cellulare.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MRG1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cited2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cited2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cited2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MRG1.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cited2 per lo studio della segnalazione di MRG1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Cited2 critici per la funzione di MRG1
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cited2 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal MRG1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal MRG1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cited2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal MRG1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR MRG1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cited2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cited2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.