Mrf-1 Plasmide di attivazione CRISPR (h2): sc-406689-ACT-2

L’ARID5A umano (Mrf-1) codifica un regolatore legante l’RNA contenente un dominio di interazione ricco in AT, che modula l’espressione dei geni infiammatori stabilizzando selettivamente gli mRNA di alcune citochine, inclusa IL6, contribuendo così a plasmare le risposte immunitarie innate e adattative. ARID5A integra i segnali a valle delle vie TLR/IL-1R e NF-κB e controbilancia i programmi di degradazione mediati da RNasi per controllare l’entità e la durata dell’attivazione immunitaria. Un’attività deregolata di ARID5A è stata associata a una produzione aberrante di citochine e a patologie immuno-mediate in contesti quali autoimmunità, infiammazione cronica e infiammazione associata ai tumori. L’editing genetico di ARID5A supporta studi meccanicistici sul controllo post-trascrizionale, sulla differenziazione e attivazione delle cellule immunitarie e sulla mappatura delle vie delle reti citochiniche in modelli cellulari umani.

Mrf-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h2) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ARID5A senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Mrf-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h2) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ARID5A nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ARID5A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Mrf-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ARID5A nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Mrf-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Mrf-1 nelle cellule tumorali con espressione di ARID5A silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.