mPRε Particelle di Attivazione Lentivirale (m2): sc-429117-LAC-2

Il gene murino Paqr9 codifica il recettore di membrana del progesterone epsilon (mPRε), una proteina della famiglia PAQR a sette domini transmembrana coinvolta nella segnalazione rapida e non genomica del progesterone a livello della membrana plasmatica. Si ritiene che mPRε moduli cascate di secondi messaggeri di tipo GPCR-like, inclusa la regolazione dell’AMPc e della dinamica del calcio intracellulare, influenzando così programmi di segnalazione cellulare legati alla risposta agli ormoni steroidei. L’espressione di Paqr9 è stata associata alla fisiologia neuroendocrina e riproduttiva, e un’alterata segnalazione correlata al progesterone è rilevante per studi su fertilità, regolazione dell’asse dello stress e biologia dei tumori ormono-dipendenti. L’editing genetico di Paqr9 in modelli murini consente di analizzare i meccanismi delle vie steroidee avviate dalla membrana, il crosstalk recettoriale con la segnalazione del recettore nucleare del progesterone e i conseguenti adattamenti trascrizionali e metabolici in tessuti o tipi cellulari definiti.

Le particelle di attivazione lentivirale mPRε (m2) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Paqr9 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale mPRε (m2) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Paqr9, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di mPRε. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Paqr9 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.