mPRε Plasmídeo de ativação de CRISPR (m2): sc-429117-ACT-2

O gene Paqr9 de camundongo codifica o receptor de progesterona de membrana épsilon (mPRε), um membro da família PAQR implicado na sinalização rápida e não genômica da progesterona nas membranas celulares. Acredita-se que o mPRε module as saídas de sinalização acopladas à proteína G, influenciando vias de segundos mensageiros como o AMPc e a dinâmica do cálcio, que moldam a proliferação, a diferenciação e as respostas ao estresse em tecidos responsivos a hormônios. A desregulação de redes de sinalização esteroidal associadas ao Paqr9 tem sido relacionada a alterações na fisiologia reprodutiva e neuroendócrina e é investigada em contextos que incluem a biologia de tumores dependentes de hormônios e a inflamação metabólica. Estudos de edição gênica e de genômica funcional direcionados ao Paqr9 sustentam a dissecação mecanística de vias responsivas à progesterona, do crosstalk entre receptores e de programas de sinalização específicos de tipo celular em modelos murinos e em sistemas celulares engenheirados.

mPRε O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m2) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Paqr9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

mPRε O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m2) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Paqr9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Paqr9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de mPRε. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Paqr9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de mPRε no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via mPRε em células tumorais com expressão de Paqr9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.