MOX-2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403723-ACT

Il gene umano **MEOX2** codifica il fattore di trascrizione homeobox **MOX-2**, un regolatore nucleare dei programmi di espressione genica dello sviluppo che influenzano la differenziazione mesenchimale, il comportamento delle cellule vascolari e il patterning dei tessuti. MOX-2 si integra in reti trascrizionali che controllano la specificazione di linea e il rimodellamento della matrice extracellulare, con ruoli riportati nella biologia delle cellule endoteliali e della muscolatura liscia e un controllo dipendente dal contesto di geni del ciclo cellulare e della risposta allo stress. Alterazioni dell’attività di MEOX2 sono state associate a disfunzioni vascolari e a stati di differenziazione aberranti, rendendolo rilevante per studi su angiogenesi, rimodellamento di tipo fibrotico e disregolazione dello sviluppo. In quanto regolatore trascrizionale, MOX-2 viene comunemente studiato mediante analisi dei profili di espressione e saggi basati sulla cromatina per mappare i bersagli a valle e le interazioni tra vie di segnalazione.

MOX-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MEOX2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MOX-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MEOX2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MEOX2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MOX-2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MEOX2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MOX-2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MOX-2 nelle cellule tumorali con espressione di MEOX2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.