MMP9 Plasmide Double Nickase (h): sc-400083-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MMP9 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il MMP9 Double Nickase Plasmid (h) e il MMP9 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira MMP9. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: MMP9 Antibody (E-11): sc-393859
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MMP9 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400083-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MMP9 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400083-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MMP9 (metallopeptidasi della matrice 9) codifica un’endopeptidasi secreta, zinco-dipendente, che degrada componenti della matrice extracellulare come il collagene di tipo IV e la gelatina, coordinando il rimodellamento tissutale e il turnover della membrana basale. L’attività di MMP9 è regolata dall’attivazione della sua forma zimogena e dall’inibizione da parte dei TIMP, collegandola a reti di proteasi che modulano la migrazione cellulare, le dinamiche di adesione e la segnalazione infiammatoria. Partecipa a processi quali l’angiogenesi, l’extravasazione dei leucociti e la riparazione delle ferite, ed è spesso studiata nel contesto di programmi di rimodellamento della MEC a valle di citochine, fattori di crescita e della segnalazione MAPK/NF-κB. Un’espressione o un’attività di MMP9 deregolate sono state associate all’invasione e metastatizzazione tumorale, al rimodellamento cardiovascolare, a disturbi infiammatori cronici e alla neuroinfiammazione.
MMP9 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MMP9 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MMP9. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MMP9. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MMP9 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.