MLL3 Plasmide Double Nickase (h): sc-402052-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MLL3 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il MLL3 Double Nickase Plasmid (h) e il MLL3 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira KMT2C. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MLL3 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402052-NIC | 20 µg | $410.00 |
KMT2C (MLL3) codifica una metiltransferasi istonica contenente un dominio SET che catalizza prevalentemente la mono-metilazione di H3K4 sugli enhancer, plasmando l’accessibilità della cromatina e programmi trascrizionali dipendenti dal contesto. In quanto componente centrale di complessi regolatori di tipo COMPASS, MLL3 coordina la comunicazione enhancer–promotore e integra, durante lo sviluppo e la differenziazione, segnali provenienti da fattori di trascrizione determinanti per il destino di linea. La compromissione di KMT2C altera l’architettura degli enhancer e l’omeostasi trascrizionale, con effetti su vie legate alla risposta al danno al DNA, al controllo del ciclo cellulare e alle decisioni di destino cellulare. Alterazioni di KMT2C sono ricorrenti in molteplici tipi di cancro e nei disturbi del neurosviluppo, rendendo MLL3 un nodo chiave per lo studio della disregolazione epigenetica.
MLL3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KMT2C nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KMT2C. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KMT2C. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KMT2C interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.