MICA Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-418864-LAC

Il gene MICA umano codifica per la sequenza A correlata alle catene polipeptidiche dell’MHC di classe I, un ligando inducibile da stress esposto sulla superficie cellulare che interagisce con il recettore attivante NKG2D sulle cellule NK e su sottopopolazioni di cellule T CD8⁺. La sua espressione è regolata da vie di segnalazione attivate dal danno al DNA e dallo stress cellulare e si integra con i programmi di sorveglianza immunitaria che controllano il riconoscimento citotossico e la segnalazione citochinica. MICA è inoltre soggetta a shedding proteolitico e a variazioni alleliche, processi che possono modulare l’intensità della segnalazione mediata da NKG2D e favorire l’evasione immunitaria. Un’espressione e uno shedding di MICA deregolati sono stati associati all’immunobiologia dei tumori, alle risposte alle infezioni virali e a condizioni infiammatorie, rendendola un nodo utile per studiare il dialogo tra immunità innata e adattativa.

Le particelle di attivazione lentivirale MICA (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di MICA in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale MICA (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione MICA, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di MICA. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo MICA e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.