METTL6 Plasmide Double Nickase (h): sc-416547-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- METTL6 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il METTL6 Double Nickase Plasmid (h) e il METTL6 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira METTL6. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: METTL6 Antibody (F-8): sc-515214
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
METTL6 Plasmide Double Nickase (h) | sc-416547-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
METTL6 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-416547-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
METTL6 codifica una metiltransferasi dipendente dalla S-adenosil-L-metionina implicata nella modifica dell’RNA, con un’attività riportata verso specifici tRNA citosolici che può influenzare la fedeltà della traduzione e l’output del proteoma. Modellando i pattern di metilazione dei tRNA, METTL6 è collegata a processi cellulari quali il controllo della traduzione, la proteostasi e l’adattamento allo stress, che possono a loro volta influenzare i programmi di proliferazione e differenziamento. La disregolazione degli enzimi di modifica dell’RNA, incluse le metiltransferasi dei tRNA, è stata associata ad alterazioni dei fenotipi di crescita e dell’accoppiamento tra trascrittoma e proteoma in contesti di malattia umana, rendendo METTL6 un bersaglio rilevante per studi meccanicistici. Nei modelli cellulari umani, la perturbazione di METTL6 consente di indagare come i marcatori epitranscrittomici dei tRNA si interfaccino con la regolazione dell’espressione genica e con le transizioni di stato cellulare.
METTL6 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus METTL6 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di METTL6. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di METTL6. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con METTL6 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.