METTL3 Plasmide Double Nickase (m): sc-425096-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- METTL3 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il METTL3 Double Nickase Plasmid (m) e il METTL3 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Mettl3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
METTL3 Plasmide Double Nickase (m) | sc-425096-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
METTL3 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-425096-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Mettl3 codifica METTL3, il nucleo catalitico del complesso “writer” della N6-metiladenosina (m6A) dell’mRNA, che deposita marcature m6A su RNA codificanti e non codificanti per modulare lo splicing, l’esportazione nucleare, la traduzione e la degradazione dell’RNA. Nelle cellule di topo, il rimodellamento m6A dipendente da METTL3 si integra con programmi trascrizionali e vie di sorveglianza dell’RNA, plasmando decisioni di destino cellulare, risposte allo stress e specificazione di linea. Un’attività alterata di METTL3 è stata associata a una deregolazione del controllo epitranscrittomico in fenotipi dello sviluppo e in contesti rilevanti per la malattia, inclusi segnalazione oncogenica, regolazione immunitaria e neurobiologia. In quanto regolatore epitranscrittomico centrale, METTL3 è spesso studiata per collegare la metilazione dell’RNA a cambiamenti a livello di via in proliferazione, differenziamento e metabolismo dell’RNA.
METTL3 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Mettl3 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Mettl3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Mettl3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Mettl3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.