MEK-7 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402363-ACT

Il gene umano MAP2K7 codifica MEK-7, una chinasi MAP chinasi a doppia specificità che fosforila e attiva preferenzialmente JNK (MAPK8/9) a valle di MAP3K come ASK1 e TAK1. Questa chinasi funge da nodo chiave nella segnalazione attivata dallo stress, regolando programmi trascrizionali che controllano l’apoptosi, la produzione di citochine, la differenziazione e il rimodellamento del citoscheletro. L’attività di MEK-7 integra segnali infiammatori e di stress ossidativo con l’espressione genica dipendente da AP-1, plasmando le risposte immunitarie innate e la tolleranza cellulare allo stress. Una segnalazione MAP2K7–JNK deregolata è stata implicata in meccanismi rilevanti per la plasticità delle cellule tumorali, la neuroinfiammazione e la biologia dello stress metabolico, rendendola un bersaglio utile per studi di mappatura delle vie di segnalazione e di perturbazione.

MEK-7 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MAP2K7 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MEK-7 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MAP2K7 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MAP2K7, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MEK-7. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MAP2K7 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MEK-7 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MEK-7 nelle cellule tumorali con espressione di MAP2K7 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.