MEF-2D Plasmide Double Nickase (h): sc-403475-NIC

MEF2D codifica per il fattore di trascrizione umano MEF-2D, una proteina legante il DNA della famiglia MADS-box/MEF2 che integra la segnalazione calcio-dipendente con programmi di espressione genica specifici del contesto. MEF-2D regola la differenziazione e la trascrizione adattativa in molteplici linee cellulari, inclusi stati miogenici e neuronali, cooperando con cofattori come le HDAC di classe IIa e rispondendo alle vie MAPK e calcineurina. Attraverso queste interazioni sensibili ai segnali, MEF-2D contribuisce a coordinare lo stato della cromatina e gli output trascrizionali che modellano il controllo del ciclo cellulare, la sopravvivenza e l’identità di linea. Un’attività deregolata di MEF2D e reti trascrizionali guidate da MEF2D alterate sono state implicate nella riprogrammazione trascrizionale associata al cancro e nella genetica delle neoplasie ematologiche, supportandone l’uso come nodo funzionale in studi su vie di segnalazione e meccanismi di malattia.

MEF-2D Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MEF2D nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MEF2D. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MEF2D. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MEF2D interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.