MCP-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401046-ACT

CCL2 codifica a proteína quimioatraente de monócitos-1 (MCP-1), uma quimiocina CC secretada que direciona a quimiotaxia de monócitos, células T de memória e células dendríticas para locais de estresse tecidual. A MCP-1 sinaliza principalmente por meio do CCR2 para coordenar o tráfego de leucócitos, a ativação endotelial e a polarização de macrófagos, integrando-se a programas inflamatórios mediados por NF-κB e a redes de citocinas/quimiocinas. A expressão desregulada de CCL2/MCP-1 é frequentemente associada à inflamação crônica, fibrose, disfunção metabólica e recrutamento mieloide associado a tumores, tornando-se um alvo molecular amplamente utilizado para estudar a infiltração de células imunes e a remodelação do microambiente.

MCP-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CCL2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MCP-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CCL2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CCL2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MCP-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CCL2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MCP-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MCP-1 em células tumorais com expressão de CCL2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.