MBOAT2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-426448

Panoramica

Mboat2 codifica per membrane bound O-acyltransferase domain containing 2 (MBOAT2), un’aciltransferasi associata al reticolo endoplasmatico (RE) e alle membrane, implicata nel rimodellamento dei fosfolipidi tramite la riacilazione dei lisofosfolipidi. Influenzando l’incorporazione di catene aciliche nei glicerofosfolipidi di membrana, MBOAT2 può modificare la composizione delle membrane, l’omeostasi degli organelli e processi di segnalazione dipendenti dai lipidi collegati alle risposte cellulari allo stress. Il metabolismo fosfolipidico alterato è ampiamente rilevante per disfunzioni metaboliche, infiammazione e rimodellamento delle membrane associato al cancro, rendendo Mboat2 un utile punto di partenza per studi meccanicistici di fenotipi guidati dai lipidi. Nei sistemi murini, la perturbazione genetica di Mboat2 supporta analisi a livello di via delle reti di aciltransferasi e del rimodellamento lipidico compensatorio.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MBOAT2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Mboat2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Mboat2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Mboat2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MBOAT2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Mboat2 per lo studio della segnalazione di MBOAT2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Mboat2 critici per la funzione di MBOAT2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Mboat2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MBOAT2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal MBOAT2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Mboat2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MBOAT2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR MBOAT2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Mboat2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Mboat2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.