MaxiKβ Plasmide Double Nickase (h): sc-403096-NIC

KCNMB1 codifica la subunità regolatoria β1 del canale del potassio a grande conduttanza, attivato da calcio e voltaggio (BK/MaxiK), che modula il gating del canale aumentando l’apparente sensibilità al Ca²⁺ e contribuendo a modellare la ripolarizzazione di membrana. Nella muscolatura liscia umana e in altri tessuti eccitabili, MaxiKβ1 collega i segnali intracellulari di Ca²⁺ all’efflusso di potassio, influenzando il tono vascolare, la contrattilità delle vie aeree e l’attività di scarica neuronale tramite una regolazione a feedback del potenziale di membrana. Questo ruolo modulatore collega KCNMB1 alla segnalazione Ca²⁺-dipendente, all’accoppiamento elettromeccanico e alle vie responsivi a ossido nitrico/cGMP che convergono sul controllo dei canali ionici. Alterazioni della funzione della subunità β1 dei canali BK sono state studiate nel contesto della regolazione della pressione arteriosa, dell’iperreattività della muscolatura liscia e dei disturbi dell’eccitabilità, rendendo KCNMB1 un bersaglio utile per la ricerca meccanicistica sui canali ionici.

MaxiKβ Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KCNMB1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KCNMB1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KCNMB1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KCNMB1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.