MaxiKβ Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-403096-NIC

KCNMB1 codifica a subunidade regulatória β1 do canal de potássio de grande condutância ativado por cálcio e voltagem (BK/MaxiK), que ajusta a abertura/fechamento do canal ao aumentar a sensibilidade aparente ao Ca²⁺ e ao moldar a repolarização da membrana. No músculo liso humano e em outros tecidos excitáveis, a MaxiKβ1 acopla sinais intracelulares de Ca²⁺ ao efluxo de potássio, influenciando o tônus vascular, a contratilidade das vias aéreas e o disparo neuronal por meio da regulação por feedback do potencial de membrana. Esse papel modulador liga o KCNMB1 à sinalização dependente de Ca²⁺, ao acoplamento eletromecânico e a vias responsivas a óxido nítrico/cGMP que convergem para o controle de canais iônicos. Alterações na função da subunidade β1 do canal BK têm sido investigadas no contexto da regulação da pressão arterial, da hiper-reatividade do músculo liso e de distúrbios de excitabilidade, tornando o KCNMB1 um alvo útil para pesquisas mecanísticas sobre canais iônicos.

MaxiKβ O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus KCNMB1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de KCNMB1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função KCNMB1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com KCNMB1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.