MafG Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-421533-ACT

Mafg codifica MafG, un fattore di trascrizione della famiglia small Maf con dominio basic leucine zipper, che forma eterodimeri con proteine CNC come NFE2L2/NRF2 per regolare l’espressione genica dipendente dagli elementi di risposta antiossidante (ARE). Nelle cellule murine, MafG contribuisce all’omeostasi redox, al metabolismo degli xenobiotici e all’adattamento cellulare allo stress ossidativo ed elettrofilo, modulando programmi trascrizionali legati al metabolismo del glutatione e agli enzimi di detossificazione. MafG influenza inoltre la biologia delle cellule ematopoietiche e immunitarie tramite il controllo trascrizionale di geni di linea e di risposta allo stress. La disregolazione dell’asse small Maf/NRF2 è associata ad alterazioni della segnalazione dello stress ossidativo e a stati infiammatori, rendendo Mafg un nodo utile per studi meccanicistici delle vie di risposta allo stress.

MafG Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Mafg senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MafG Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Mafg nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Mafg, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MafG. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Mafg nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MafG nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MafG nelle cellule tumorali con espressione di Mafg silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.