Mad 3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406722

Panoramica

MXD3 (Mad 3) è un fattore di trascrizione della famiglia basic helix–loop–helix leucine zipper che forma eterodimeri con MAX per modulare l’espressione genica dipendente dagli E-box all’interno della rete regolatoria MYC/MAX/MXD. A differenza di altri membri della famiglia MXD, che comunemente rafforzano la repressione trascrizionale e i programmi di differenziamento, MXD3 è stato associato a stati trascrizionali legati alla proliferazione in specifici contesti cellulari, influenzando la progressione del ciclo cellulare e le scelte di linea cellulare. Attraverso questo asse, MXD3 integra segnali che modellano gli output trascrizionali associati alla cromatina e può influenzare vie che regolano il controllo della crescita e la regolazione dello sviluppo. Un’alterata espressione di MXD3 è stata riportata in molteplici dataset trascrittomici correlati al cancro, a supporto della sua rilevanza nello studio dei circuiti trascrizionali oncogenici e di fenotipi di crescita dipendenti dal contesto nelle cellule umane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Mad 3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MXD3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MXD3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MXD3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Mad 3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MXD3 per lo studio della segnalazione di Mad 3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MXD3 critici per la funzione di Mad 3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MXD3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Mad 3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Mad 3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MXD3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Mad 3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Mad 3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MXD3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MXD3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.