LZTR1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404531-ACT

LZTR1 (leucine zipper-like transcription regulator 1) codifica una proteina adattatrice della famiglia BTB-Kelch localizzata nell’apparato di Golgi e funzionante all’interno di complessi di ligasi E3 dell’ubiquitina basati su CUL3, per regolare l’ubiquitinazione e il turnover delle proteine. È stata implicata nel controllo dell’output della via RAS/MAPK tramite la modulazione delle proteine della famiglia RAS e di nodi di segnalazione correlati che influenzano proliferazione, differenziamento e omeostasi cellulare. Un’attività alterata di LZTR1 è stata associata a fenotipi di neuro-sviluppo e predisposizione tumorale, inclusi la sindrome di Noonan e la schwannomatosi, rendendola un bersaglio utile per studiare il controllo della segnalazione mediata dall’ubiquitina nelle cellule umane. In quanto regolatore legato a specifiche vie di segnalazione, LZTR1 supporta indagini meccanicistiche su proteostasi, hub di segnalazione associati alle membrane e relazioni genotipo–fenotipo.

LZTR1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di LZTR1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

LZTR1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus LZTR1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione LZTR1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di LZTR1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus LZTR1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da LZTR1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via LZTR1 nelle cellule tumorali con espressione di LZTR1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.