LYPLA3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-409535

Panoramica

PLA2G15 codifica per LYPLA3, una fosfolipasi/deacilasi lisosomiale implicata nel turnover dei fosfolipidi e nel rimodellamento dei lipidi di membrana attraverso l’idrolisi delle catene aciliche degli acidi grassi. Contribuendo al catabolismo lisosomiale dei lipidi, LYPLA3 si inserisce nei circuiti che regolano il traffico endolisosomiale, la degradazione associata all’autofagia e l’omeostasi lipidica cellulare. Un’elaborazione lisosomiale dei lipidi alterata è ampiamente rilevante nelle risposte allo stress metabolico e può influenzare la segnalazione infiammatoria e la funzione degli organelli, rendendo LYPLA3 un nodo utile per studiare perturbazioni guidate dai lipidi nelle cellule umane. L’analisi funzionale di LYPLA3 supporta studi meccanicistici sul metabolismo lipidico e su processi centrati sul lisosoma, spesso alterati in stati cellulari associati a malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO LYPLA3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PLA2G15 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PLA2G15 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PLA2G15 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina LYPLA3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PLA2G15 per lo studio della segnalazione di LYPLA3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PLA2G15 critici per la funzione di LYPLA3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PLA2G15 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal LYPLA3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal LYPLA3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PLA2G15. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal LYPLA3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR LYPLA3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PLA2G15 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PLA2G15 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.