LMO3 Plasmide Double Nickase (h): sc-417939-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- LMO3 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il LMO3 Double Nickase Plasmid (h) e il LMO3 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira LMO3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: LMO3 Antibody (1A8): sc-517019
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
LMO3 Plasmide Double Nickase (h) | sc-417939-NIC | 20 µg | $410.00 |
LMO3 codifica un regolatore trascrizionale “LIM-only”, composto in larga parte da domini LIM che legano lo zinco e che funzionano come moduli di interazione proteina–proteina, più che come motivi di legame diretto al DNA. Assemblando complessi multiproteici con fattori di trascrizione e cofattori, LMO3 contribuisce a modellare programmi di espressione genica legati alla differenziazione neuronale, alla guida assonale e al controllo, dipendente dal contesto, di proliferazione e sopravvivenza. Un’espressione deregolata di LMO3 è stata riportata in molteplici contesti tumorali, tra cui il neuroblastoma e altri tumori solidi, dove è spesso associata a stati di differenziazione alterati e a fenotipi invasivi. Queste caratteristiche rendono LMO3 un bersaglio utile per studiare reti trascrizionali dello sviluppo, la riprogrammazione oncogena e i meccanismi di specificazione di linea.
LMO3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus LMO3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di LMO3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di LMO3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con LMO3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.