LHX2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401071-ACT

LHX2 (LIM homeobox 2) è un fattore di trascrizione nucleare contenente domini LIM e un homeodominio che regola le decisioni sul destino cellulare durante lo sviluppo e la definizione dei pattern tissutali. Nelle cellule umane, LHX2 contribuisce a programmi trascrizionali che controllano proliferazione, differenziamento e mantenimento di stati simili a quelli progenitori, con effetti a valle sull’organizzazione della cromatina e sulle reti geniche che specificano la linea cellulare. La sua attività si intreccia con la segnalazione dello sviluppo e con i circuiti regolatori della trascrizione che modellano l’organogenesi, inclusi contesti neurali ed epiteliali. Un’espressione deregolata di LHX2 è stata riportata in molteplici firme di espressione associate a malattie, rendendolo un nodo utile per studiare i meccanismi della differenziazione aberrante e del controllo trascrizionale.

LHX2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di LHX2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

LHX2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus LHX2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione LHX2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di LHX2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus LHX2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da LHX2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via LHX2 nelle cellule tumorali con espressione di LHX2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.