Lck Plasmide Double Nickase (h): sc-400434-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Lck Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Lck Double Nickase Plasmid (h) e il Lck Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira LCK. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Lck Antibody (3A5): sc-433
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Lck Plasmide Double Nickase (h) | sc-400434-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Lck Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400434-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LCK codifica Lck, una tirosin-chinasi della famiglia Src che avvia la segnalazione a valle del recettore dei linfociti T fosforilando i motivi ITAM e coordinando il reclutamento di ZAP70 e dei complessi adattatori. Attraverso questi eventi prossimali, Lck regola l’attivazione delle vie MAPK/ERK, PI3K–AKT e NF-κB/NFAT, che controllano lo sviluppo e l’attivazione dei linfociti T, la produzione di citochine e la formazione della sinapsi immunologica. Un’attività o un’espressione disregolata di LCK è associata ad alterazioni degli stati di segnalazione dei linfociti ed è stata implicata nella disregolazione immunitaria e nella biologia delle neoplasie ematologiche. In quanto nodo nelle reti di fosforilazione prossimali al recettore, Lck è ampiamente studiata in fosfoproteomica, nella segnalazione mediata da chinasi e nella genomica funzionale delle cellule immunitarie umane.
Lck Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus LCK nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di LCK. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di LCK. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con LCK interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.