Plásmido Doble Nickase (h) Layilin: sc-408326-NIC

LAYN codifica layilina, un receptor transmembrana tipo lectina C enriquecido en los rizados (ruffles) de la membrana y en sitios de adhesión, donde conecta señales extracelulares con el citoesqueleto cortical de actina. La layilina se asocia con microambientes ricos en hialuronano e interactúa con reguladores del citoesqueleto y de la señalización para influir en la remodelación de la forma celular, la motilidad y las vías de señalización dependientes de la adhesión. Como componente de interfaces dinámicas célula–matriz, LAYN se estudia en contextos en los que se alteran los programas migratorios y las interacciones inmunes–estromales, incluida la biología del microambiente tumoral y la remodelación tisular inflamatoria. Se ha informado de una expresión desregulada de LAYN en múltiples conjuntos de datos transcriptómicos asociados a enfermedades, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico para investigar fenotipos de adhesión y migración.

Layilin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus LAYN en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de LAYN. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de LAYN. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con LAYN alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.