Layilin Plasmide Double Nickase (h): sc-408326-NIC

LAYN codifica la layilina, un recettore transmembrana di tipo lectin-like C, arricchito nei ruffle di membrana e nei siti di adesione, dove collega i segnali extracellulari al citoscheletro di actina corticale. La layilina si associa a microambienti ricchi di ialuronano e interagisce con regolatori del citoscheletro e della segnalazione, influenzando il rimodellamento della forma cellulare, la motilità e le vie di segnalazione dipendenti dall’adesione. In quanto componente di interfacce dinamiche cellula–matrice, LAYN viene studiato in contesti in cui i programmi migratori e le interazioni immuno–stromali risultano alterati, inclusi la biologia del microambiente tumorale e il rimodellamento infiammatorio dei tessuti. Un’espressione deregolata di LAYN è stata riportata in molteplici dataset trascrittomici associati a malattie, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico per interrogare i fenotipi di adesione e migrazione.

Layilin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus LAYN nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di LAYN. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di LAYN. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con LAYN interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.