LAT Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401281

Panoramica

Il Linker per l’attivazione delle cellule T (LAT) è una proteina adattatrice transmembrana che, a valle dell’ingaggio del recettore delle cellule T (TCR), viene fosforilata su residui di tirosina e funge da impalcatura per l’assemblaggio di complessi di segnalazione multiproteici. LAT coordina il reclutamento di GRB2, GADS, PLCγ1 e SOS per propagare il segnale attraverso il flusso di calcio e le vie Ras–MAPK/ERK e NFAT/NF-κB, modulando l’attivazione delle cellule T, la produzione di citochine e l’organizzazione della sinapsi immunologica. Nelle cellule umane, un’alterata integrazione dei segnali dipendente da LAT è rilevante per lo studio della disregolazione immunitaria, inclusi i meccanismi che contribuiscono all’autoimmunità, a fenotipi simili all’immunodeficienza e a programmi aberranti di attivazione dei linfociti. Poiché LAT si colloca in un nodo critico della segnalazione prossimale del TCR, è ampiamente utilizzata come punto di accesso per analizzare il cablaggio delle vie, il controllo tramite feedback e la codifica ampiezza–durata del segnale nell’immunità adattativa.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO LAT (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene LAT in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del LAT insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto LAT a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina LAT.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di LAT per lo studio della segnalazione di LAT, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni LAT critici per la funzione di LAT
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di LAT per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal LAT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal LAT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus LAT. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal LAT Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR LAT (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia LAT per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio LAT definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.