LAT Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401281

Visão geral

O “linker for activation of T cells” (LAT) é uma proteína adaptadora transmembranar que se torna fosforilada em tirosina a jusante do engajamento do receptor de células T (TCR) e atua como um arcabouço para montar complexos de sinalização multiproteicos. O LAT coordena o recrutamento de GRB2, GADS, PLCγ1 e SOS para propagar a sinalização por meio de fluxo de cálcio, Ras–MAPK/ERK e vias de NFAT/NF-κB, moldando a ativação de células T, a produção de citocinas e a organização da sinapse imune. Em células humanas, a integração alterada de sinais dependente de LAT é relevante para estudos de desregulação imunológica, incluindo mecanismos que contribuem para autoimunidade, fenótipos semelhantes a imunodeficiência e programas aberrantes de ativação de linfócitos. Como o LAT ocupa um nó crítico na sinalização proximal do TCR, ele é amplamente usado como ferramenta para dissecar a arquitetura das vias, o controle por feedback e a codificação de amplitude–duração do sinal na imunidade adaptativa.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO LAT (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene LAT em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do LAT, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do LAT na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína LAT.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de LAT para a investigação da sinalização de LAT, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) LAT críticos para a função LAT
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos LAT para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo LAT Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo LAT Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus LAT. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo LAT Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR LAT (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia LAT para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo LAT definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.