Ku-70 Plasmide Double Nickase (h): sc-400378-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Ku-70 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Ku-70 Double Nickase Plasmid (h) e il Ku-70 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira XRCC6. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Ku70 Antibody (E-5): sc-17789
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Ku-70 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400378-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Ku-70 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400378-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
XRCC6 codifica la subunità Ku-70 dell’eterodimero Ku, un sensore chiave delle rotture a doppio filamento del DNA che si lega alle estremità del DNA e recluta DNA-PKcs per avviare la giunzione delle estremità non omologa classica (c-NHEJ). Ku-70 partecipa alla ricombinazione V(D)J, alla protezione dei telomeri e alle risposte allo stress replicativo, contribuendo a mantenere la stabilità del genoma durante la risposta al danno al DNA. L’alterazione della funzione di Ku modifica la scelta del percorso tra NHEJ e ricombinazione omologa e può aumentare le traslocazioni cromosomiche e la radiosensibilità. Un’attività o un’espressione deregolata di XRCC6 è stata associata a fenotipi di instabilità genomica osservati in molteplici contesti tumorali e ad alterazioni dello sviluppo del sistema immunitario dovute a difetti nella giunzione delle estremità.
Ku-70 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus XRCC6 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di XRCC6. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di XRCC6. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con XRCC6 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.