KRTAP14 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423901

Panoramica

Krtap14 codifica la proteina 14 associata alla cheratina (keratin-associated protein 14), un piccolo componente strutturale ricco di cisteina della matrice del fusto del pelo nel topo, che contribuisce alla resistenza meccanica e alla reticolazione dei filamenti intermedi di cheratina. KRTAP14 partecipa ai programmi di differenziamento terminale dei cheratinociti del follicolo pilifero ed è integrata nei processi che regolano l’assemblaggio della fibra del pelo, l’organizzazione di cuticola e corteccia e la stabilizzazione mediata da legami disolfuro. Un’alterata espressione o variazioni strutturali delle proteine associate alla cheratina sono collegate a cambiamenti della consistenza del pelo e a fenotipi di fragilità, rendendo Krtap14 rilevante per lo studio dell’integrità del fusto del pelo e della biologia follicolare. La sua espressione viene spesso considerata insieme alle reti di cheratinizzazione e alle vie associate al complesso di differenziamento epidermico, che modellano la formazione degli annessi cutanei.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO KRTAP14 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Krtap14 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Krtap14 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Krtap14 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina KRTAP14.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Krtap14 per lo studio della segnalazione di KRTAP14, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Krtap14 critici per la funzione di KRTAP14
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Krtap14 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal KRTAP14 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal KRTAP14 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Krtap14. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal KRTAP14 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR KRTAP14 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Krtap14 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Krtap14 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.