KRIT1 Plasmide Double Nickase (h): sc-404927-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- KRIT1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il KRIT1 Double Nickase Plasmid (h) e il KRIT1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira KRIT1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: KRIT1 Antibody (E-8): sc-514371
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
KRIT1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-404927-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
KRIT1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404927-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KRIT1 (Krev interaction trapped protein 1) codifica una proteina scaffold essenziale per l’integrità delle giunzioni endoteliali e per la morfogenesi vascolare. KRIT1 assembla complessi con CCM2 e PDCD10 e si interfaccia con la segnalazione di RAP1 per stabilizzare le giunzioni aderenti basate su VE-caderina, modulando al contempo la tensione citoscheletrica dipendente da RhoA/ROCK e le correlate risposte MAPK e allo stress ossidativo. L’alterazione di KRIT1 compromette la funzione di barriera dell’endotelio e la stabilità del lume, contribuendo alla patologia molecolare delle malformazioni cavernose cerebrali (CCM) e a fenotipi più ampi legati all’omeostasi vascolare. In quanto gene umano, KRIT1 è ampiamente studiato nell’angiogenesi, nella meccanotrasduzione e nelle reti di segnalazione endoteliale associate all’infiammazione.
KRIT1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KRIT1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KRIT1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KRIT1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KRIT1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.