Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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KIR6.2 Plasmide Double Nickase (m): sc-421232-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- KIR6.2 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il KIR6.2 Double Nickase Plasmid (m) e il KIR6.2 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Kcnj11. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: KIR6.2 Antibody (B-9): sc-390104
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
KIR6.2 Plasmide Double Nickase (m) | sc-421232-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
KIR6.2 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-421232-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Kcnj11 codifica la subunità KIR6.2 del canale del potassio a rettificazione entrante, un componente fondamentale dei canali del K+ sensibili all’ATP (KATP) che collegano lo stato energetico cellulare all’eccitabilità di membrana. Nelle cellule β pancreatiche del topo, KIR6.2 si associa ai recettori delle sulfoniluree per regolare la conduttanza del K+, l’ingresso di calcio e la dinamica della secrezione di insulina in risposta alle variazioni del rapporto ATP/ADP. Nei tessuti eccitabili, tra cui cuore, cervello e muscolo scheletrico, l’attività dei canali KATP influenza la generazione dei potenziali d’azione, le risposte allo stress metabolico e la citoprotezione durante le sfide energetiche. La disregolazione del gating dei canali legata a Kcnj11 è stata associata ad alterazioni dell’omeostasi del glucosio e a fenotipi di eccitabilità, rendendolo un bersaglio ampiamente utilizzato per studi meccanicistici sull’accoppiamento tra metabolismo e segnalazione elettrica.
KIR6.2 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Kcnj11 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Kcnj11. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Kcnj11. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Kcnj11 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.