KIFC1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405597

Panoramica

KIFC1 codifica una proteina motoria della famiglia kinesina-14 con dominio C-terminale, che si muove verso le estremità meno dei microtubuli e contribuisce all’organizzazione del fuso mitotico, al clustering dei centrosomi e alla corretta segregazione dei cromosomi. Regolando la dinamica dei microtubuli e l’integrità dei poli del fuso, KIFC1 si integra con il controllo del ciclo cellulare e con le risposte allo stress mitotico che determinano la capacità proliferativa e la stabilità del genoma. Un’attività di KIFC1 deregolata è stata associata a mitosi aberranti, aneuploidia e a una sopravvivenza alterata delle cellule che presentano amplificazione dei centrosomi. Queste caratteristiche rendono KIFC1 un nodo utile per studiare i meccanismi di assemblaggio del fuso, l’instabilità cromosomica e il trasporto basato sui microtubuli nelle cellule umane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO KIFC1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene KIFC1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del KIFC1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto KIFC1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina KIFC1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di KIFC1 per lo studio della segnalazione di KIFC1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni KIFC1 critici per la funzione di KIFC1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di KIFC1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal KIFC1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal KIFC1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus KIFC1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal KIFC1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR KIFC1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia KIFC1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio KIFC1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.