KDEL receptor 3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-430617

Panoramica

Kdelr3 codifica per il recettore KDEL 3, un recettore di recupero residente nel Golgi che riconosce il motivo C-terminale KDEL sugli chaperoni luminali del RE sfuggiti e li riporta dal Golgi al reticolo endoplasmatico tramite traffico retrogrado dipendente da COPI. Mantenendo la proteostasi del RE e l’omeostasi del calcio, KDELR3 influenza la segnalazione della risposta alle proteine mal ripiegate (UPR), la fedeltà della via secretoria e il rimodellamento adattativo allo stress del compartimento secretorio precoce. L’alterazione del recupero mediato dai recettori KDEL può modificare la maturazione delle glicoproteine e la sensibilità allo stress del RE, processi spesso sfruttati negli studi sulla neurodegenerazione, sullo stress metabolico e sulle esigenze secretorie delle cellule tumorali. Nei sistemi murini, Kdelr3 rappresenta un nodo sperimentalmente gestibile per analizzare come il trasporto RE–Golgi si interfacci con le reti di proteostasi e con le transizioni di stato cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO KDEL receptor 3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Kdelr3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Kdelr3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Kdelr3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina KDEL receptor 3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Kdelr3 per lo studio della segnalazione di KDEL receptor 3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Kdelr3 critici per la funzione di KDEL receptor 3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Kdelr3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal KDEL receptor 3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal KDEL receptor 3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Kdelr3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal KDEL receptor 3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR KDEL receptor 3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Kdelr3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Kdelr3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.