KAI 1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401317-NIC

CD82 (KAI1) è una glicoproteina di superficie cellulare appartenente alla famiglia delle tetraspanine, che organizza microdomini di membrana e regola l’adesione, la motilità e la segnalazione recettoriale dipendenti dalle integrine. Modulando le interazioni tra tetraspanine, integrine e recettori per i fattori di crescita, KAI1 influenza il rimodellamento del citoscheletro, l’endocitosi e le vie a valle associate alla migrazione e alla sopravvivenza cellulare. L’alterazione dell’espressione o della localizzazione di CD82 è frequentemente studiata nel contesto della progressione tumorale, dell’invasione e della disseminazione metastatica, nonché del traffico delle cellule immunitarie e della segnalazione infiammatoria. Queste caratteristiche rendono CD82 un bersaglio utile per analizzare l’architettura della segnalazione di membrana, le dinamiche di adesione e il crosstalk tra vie di segnalazione in modelli cellulari umani.

KAI 1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CD82 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CD82. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CD82. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CD82 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.