KA2 Plasmide Double Nickase (h): sc-405272-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- KA2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il KA2 Double Nickase Plasmid (h) e il KA2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GRIK5. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
KA2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-405272-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
KA2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405272-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GRIK5 codifica la subunità KA2 del recettore per il kainato, un componente dei recettori ionotropici del glutammato che si assembla con altre subunità del kainato per modulare la trasmissione sinaptica eccitatoria e l’eccitabilità delle reti neuronali. KA2 contribuisce alla funzione del canale cationico attivato dal ligando, influenzando la plasticità sinaptica, la modulazione presinaptica e le vie di segnalazione a valle legate al calcio e alla MAPK. Alterazioni della segnalazione glutammatergica che coinvolgono GRIK5 sono state studiate in ambito neuroevolutivo e neuropsichiatrico, inclusi la suscettibilità alle crisi e la disfunzione dei circuiti, in cui la composizione recettoriale può influire sull’equilibrio eccitatorio–inibitorio. In quanto proteina di membrana sinaptica, KA2 è rilevante anche per studi sul traffico dei recettori, la maturazione delle sinapsi e il rimodellamento dipendente dall’attività in modelli neuronali umani.
KA2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GRIK5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GRIK5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GRIK5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GRIK5 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.