IRF3 Plasmide Double Nickase (m): sc-424792-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- IRF3 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il IRF3 Double Nickase Plasmid (m) e il IRF3 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Irf3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: IRF3 Antibody (D-3): sc-376455
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
IRF3 Plasmide Double Nickase (m) | sc-424792-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino *Irf3* codifica il fattore regolatore dell’interferone 3 (IRF3), un fattore di trascrizione centrale dell’immunità antivirale innata che collega il rilevamento citosolico degli acidi nucleici all’espressione dell’interferone di tipo I e dei geni stimolati dall’interferone. In seguito all’attivazione a valle delle vie dei PRR, tra cui cGAS–STING, RIG-I/MDA5–MAVS e TLR3–TRIF, IRF3 viene fosforilato da TBK1/IKKε, dimerizza e trasloca nel nucleo per coordinare programmi trascrizionali infiammatori e antivirali. La segnalazione di IRF3 interseca NF-κB e IRF7, plasmando la produzione di citochine, l’apoptosi e il rimodellamento immunometabolico durante l’infezione e l’infiammazione sterile. Un’attività deregolata di IRF3 è stata implicata nella suscettibilità alle infezioni virali, in risposte interferoniche aberranti e in patologie infiammatorie, rendendo *Irf3* un nodo chiave per studi meccanicistici della segnalazione dell’immunità innata.
IRF3 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Irf3 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Irf3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Irf3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Irf3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.