Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
IP3R-III Plasmide Double Nickase (h): sc-402138-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- IP3R-III Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il IP3R-III Double Nickase Plasmid (h) e il IP3R-III Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ITPR3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
IP3R-III Plasmide Double Nickase (h) | sc-402138-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IP3R-III Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402138-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’ITPR3 umano codifica IP3R-III, un canale di rilascio di Ca²⁺ localizzato nella membrana del reticolo endoplasmatico, attivato dall’inositolo 1,4,5-trifosfato (IP3) generato a valle della segnalazione della fosfolipasi C. Modellando la dinamica del Ca²⁺ citosolico e degli organelli, IP3R-III regola l’accoppiamento eccitazione–secrezione, la bioenergetica mitocondriale, le risposte allo stress del RE e l’apoptosi attraverso il trasferimento di Ca²⁺ nei siti di contatto RE–mitocondri. Il flusso di calcio dipendente da ITPR3 integra gli input dei GPCR e dei recettori tirosina-chinasici con programmi trascrizionali e adattamento metabolico, influenzando le decisioni sul destino cellulare. Un’espressione o una segnalazione deregolata di IP3R-III è stata associata ad alterazioni dell’omeostasi del calcio in contesti di biologia del cancro, fisiologia epiteliale e segnalazione infiammatoria, supportandone l’uso come nodo meccanicistico negli studi di via di segnalazione.
IP3R-III Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ITPR3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ITPR3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ITPR3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ITPR3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.