Integrin αE/ITGAE/CD103 Plasmide Double Nickase (h): sc-404333-NIC

ITGAE codifica l’integrina αE (CD103), che eterodimerizza con l’integrina β7 formando il recettore di adesione αEβ7, in grado di legare l’E-caderina e di favorire la ritenzione dei linfociti nei tessuti epiteliali. Questo recettore partecipa alla segnalazione “outside-in” mediata dalle integrine, che coordina il rimodellamento del citoscheletro, la migrazione cellulare e la dinamica della sinapsi immunologica, collegandosi a vie che coinvolgono le chinasi delle adesioni focali e, a valle, la segnalazione MAPK e PI3K. CD103 è un marcatore distintivo delle cellule T della memoria residenti nei tessuti e di sottopopolazioni di cellule dendritiche, contribuendo alla sorveglianza immunitaria delle mucose e alle interazioni con la barriera epiteliale. L’alterata espressione di ITGAE e gli infiltrati immunitari CD103-positivi sono ampiamente studiati sia in contesti di infiammazione cronica sia nei microambienti immunitari tumorali, poiché informano sui meccanismi di localizzazione e funzione delle cellule immunitarie.

Integrin αE/ITGAE/CD103 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ITGAE nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ITGAE. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ITGAE. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ITGAE interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.