Integrin β7/ITGB7 Plasmide Double Nickase (h): sc-404928-NIC

ITGB7 codifica l’integrina β7, una subunità recettoriale di adesione transmembrana che si associa con α4 o αE per formare α4β7 e αEβ7, coordinando il traffico e la ritenzione dei leucociti nei microambienti tissutali. Queste integrine si legano a ligandi come MAdCAM-1 ed E-caderina per sostenere l’adesione cellulare, la migrazione e il posizionamento delle cellule immunitarie, collegando il legame extracellulare al rimodellamento del citoscheletro e a una segnalazione bidirezionale “inside-out/outside-in”. Le vie dipendenti da ITGB7 contribuiscono all’homing dei linfociti verso i tessuti linfoidi associati all’intestino e alla regolazione delle risposte immunitarie mucosali. La disregolazione della segnalazione integrinica e le alterazioni dell’espressione di ITGB7 sono oggetto di studio in patologie infiammatorie e in contesti di immuno-oncologia, in cui risultano compromessi la localizzazione cellulare, le dinamiche di adesione e la sorveglianza immunitaria.

Integrin β7/ITGB7 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ITGB7 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ITGB7. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ITGB7. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ITGB7 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.